Expresia alkoholdehydrogenázy vo Vibrio natriegens

Vibrio natriegens je gramengatívna, nepatogénna baktéria, ktorá je charakteristická svojou rýchlou generačnou dobou,< 10 min a vysokým obsahom ribozomálnej DNA. V našom experimente sme pracovali s komerčne dostupným kmeňom V. natriegenes s názvom Vmax^TMExpress, ktorý je charakteristický deléciou niekoľkých génov extracelulárnych nukleáz a obsahom IPTG indukovateľnú T7-RNA polymerázovú kazetu [1]. Jedná sa o ľahko kultivovateľnú baktériu, na ktorú je možné aplikovať rovnaké techniky zaobchádzania ako v prípade E. coli. Uvedené vlastnosti by mohli viesť ku zníženiu časovej náročnosti a zefektívneniu ekonomických nárokov. Hlavným cieľom tejto práce je testovanie konkurencieschopnosti Vmax^TMExpress ku doteraz využívanej E.coli a  optimalizácia expresie ADH1 vo Vmax^TM Express, nakoľko je ADH1 využívaná  v rôznych  farmaceutických aplikáciách, pri získavaní  čistých enenatiomérnych  foriem niektorých liečiv  a taktiež  pri produkcii šesťuhlikatých vonných alkoholov pre kozmetický a farmaceutický priemysel [2].

Pri práci sme pozorovali rýchlejší rast kultúry Vmax ako E. coli. Vďaka tomu sme previedli indukciu expresie už po 1,5 h (hustota kultúry OD₆₀₀ = 0,5) od preočkovania nočnej kultúry do čerstvého média, pričom u E. coli to bolo možné až po 2,5 h. Expresiu sme analyzovali pomocou  SDS-PAGE géloch. Expresia ADH1 v kmeni  Vmax^TM Expres, bola efektívnejšia nakoľko percentuálne zastúpenie proteínu ADH1  voči celkovému obsahu produkovaných proteínov bolo vyššie ako v prípade E. coli. Rýchlejší nárast biomasy Vmax oproti E. coli sme potvrdili aj analýzou hmotnosti sušiny kultúry v časových intervaloch. Vmax^TM Express dosahuje až dvojnásobne lepšie výsledky ako E. coli. Ďalšími krokmi v našej práci je testovanie schopnosti produkcie ADH1 v kmeni Vmax^TM Express v  rôznych podmienkach ako je  zloženie média  a teplota rastu/ expresie.