”Nested” PCR test for diagnostics of Helicobacter pylori infection

”Nested” PCR test for diagnostics of Helicobacter pylori infection

Overall rating

Scientific work
100%
Design
100%
Discussion interaction
100%
UserScientific workDesignDiscussion interaction
Mgr. Dana Szabóová100%100%100%
Mgr Vladimír Heger100%100%100%
Mgr Daniel Furka100%100%-
RNDr. Žofia Nižnanská PhD.100%100%100%
Mgr. Veronika Silliková100%100%-
Mgr. Kristína Ormandyová100%100%-
ISBN: 978-80-972360-1-4

”Nested” PCR test for diagnostics of Helicobacter pylori infection

Barbora Šeligová1 , Pavol Sulo
1 Prírodovedecká fakulta Univerzity Komenského v Bratislave, Bratislava - Karlova Ves, Slovenská republika
seligova12@uniba.sk

According to the European Helicobacter Study Group the main obstacle in the treatment of H. pylori infection is reliable diagnostics. We elaborated “nested“ PCR test, based on the primers designed to the variable regions of 16S rRNA gene, to identify H. pylori in 63 gastric biopsy, 39 saliva and 20 stool samples. The test is 100 times more sensitive than widely used stool antigen test. The reliability was verified by sequencing of 44 PCR products, providing exclusively H. pylori specific DNA sequence. H. pylori was identified in 30% gastric biopsies, in 30% of stool and in 25,6% of saliva samples. The detection limits for individual method was determined by spiking the negative samples with known number of H. pylori cells. In the case of “nested“ PCR it was ≥5x103/g or ml of the sample. The main drawback in non-invasive diagnostic is associated with the low prevalence of H. pylori in stool and saliva (5x103/ml or 5x103/g) in comparison with the gastric biopsies (1x105/g – 2,5x106/g).

Thanks: 

Ďakujem Doc. MUDr. Ľudovítovi Lukáčovi, PhD. za poskytnutie vzoriek biopsií a slín, RNDr. Silvii Vaškovej za suspenziu buniek Helicobacter pylori a RNDr. Veronike Fekete za poskytnutie vzoriek stolice.

Sources: 

Bauer B., Meyer T. F. (2011) Ulcers. 2011, p. 1.
Keilberg D., Ottemann K. M. (2016) Environ. Microbiol. 18, p. 791.
Salama N. R., Hartung M. L., Müller A. (2013) Nat. Rev. Microbiol. 11, p. 385.

Presentation is not available

Discussion

mňa by zaujímalo z koľkých pacientov ste mali paralelne vzorky stolice, slín aj biopsie? V koľkých prípadoch sa Vám podarilo detegovať H.pylori vo všetkých paralelných vzorkách? Ďakujem

k dispozícii sme mali iba paralelné vzorky biopsie a slín, a to presne z 26 pacientov. H. pylori sme detegovali iba v 4 prípadoch z 26. V tomto prípade hovoríme teda o 15% úspešnosti, čo by v prípade vyššieho počtu vzoriek bolo značne vyššie číslo. V tomto projekte identifikácie H. pylori pomocou N-PCR naďalej pokračujeme, ktorého cieľom je preverenie prítomnosti H. pylori vo vzorkách biopsie, slín a stolice z jedného pacienta. Definitívnym výsledkom projektu by malo byť zavedenie ,,nested PCR“ identifikácie H. pylori do medicínskej praxe, čím by sa zamenil imunochromatografický test i histologické vyšetrenie.

aké najmenšie množstvo viete detegovať v slinách?

v slinách vieme detegovať najmenej 10 buniek H. pylori v PCR reakcii

v slinách vieme detegovať najmenej 10 buniek H. pylori v PCR reakcii