Retrovírusové reverzné transkriptázy sú využívané v metóde reverznej PCR pri diagnostike patogénov. Produkcia rozpustného enzýmu s vysokou aktivitou umožní efektívnu detekciu RNA vírusov a zabráni ich šíreniu v populácii. Heterologická produkcia reverznej transkriptázy v prokaryotických expresných systémoch vedie k tvorbe proteínových agregátov. Množstvo reverznej transkriptázy závisí od regulácie génovej expresie enzýmu, produkčného kmeňa, cielenej mutagenézy sekvencie kódujúcej proteín a pod. V práci porovnávame produkciu mutovanej a nemutovanej reverznej transkriptázy regulovanú T5 a T7 promótormi. Expresné konštrukty boli pripravené subklonovaním s použitím reštrikčných endonukleáz. Analýza rozpustných proteínových frakcií po maloobjemovej produkcii ukázala účinnosť produkcie reverznej transkriptázy s použitím T7 promótora v porovnaní s T5 promótorom.
Príspevok je výsledkom realizácie projektov APVV-17-0333, APVV-20-0284 a LISPER (ITMS2014:313011V446) na základe podpory operačného programu Integrovaná infraštruktúra financovaného z ERDF. Táto práca bola taktiež čiastočne podporená zo zdrojov Európskeho fondu regionálneho rozvoja v rámci projektu USCCCORD (ŽoNFP: NFP313020BUZ3), OP Integrovaná infraštruktúra.
1. Huber, L. B., Betz, K. a Marx, A.: Reverse Transcriptases: From Discovery and Applications to Xenobiology. ChemBioChem. 2022. 24(5): s. 1439–1451 doi:10.1002/cbic.202200521.
2. Makino, Y. et al.: Functional expression of the reverse transcriptase αβ heterodimer from avian myeloblastosis virus in Escherichia coli. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2021. 85: s. 1464–1467.
3. Oscorbin, I. P. a Filipenko, M. L.: M-MuLV reverse transcriptase: Selected properties and improved mutants. Comput. Struct. Biotechnol. 2021. J. 19: s. 6315–6327.
4. Baranauskas, A. et al.: Generation and characterization of new highly thermostable and processive M-MuLV reverse transcriptase variants. Protein Eng. Des. Sel. 2012. 25: s. 657–668.
5. Laemmli, U. K.: SDS-page Laemmli method. Nature 1970. 227: s. 680–685.
Dobrý deň, abstrakt Vášho
Dobrý deň, abstrakt Vášho príspevku je veľmi stručný, chýbajú mi tam odkazy na literatúru v danej problematike a tiež referencie pre použité metodiky. Môžete ich, prosím Vás, doplniť?
Ďakujem, ZB