Import sterolov a expresia relevantných génov v kvasinke Saccharomyces cerevisiae

Import sterolov a expresia relevantných génov v kvasinke Saccharomyces cerevisiae

Celkové hodnotenie

Vedecká práca
100%
Prevedenie (dizajn)
100%
Diskusná interakcia
PoužívateľVedecká prácaDizajnDiskusná interakcia
Mgr. Tomáš Grivalský100%100%-
ISBN: 978-80-970712-8-8

Import sterolov a expresia relevantných génov v kvasinke Saccharomyces cerevisiae

Marek Pápay1 , Martin Valachovič
1 Ústav biochémie a genetiky živočíchov SAV, Ivanka pri Dunaji, Slovenská Republika
marek.papay@savba.sk

Príjem externých sterolov z prostredia je jednou z foriem rezistencie kvasiniek voči antimykotikám, ktoré blokujú syntézu ergosterolu. V kvasinke Saccharomyces cerevisiae sú za import sterolov zodpovedné dva ABC transportéry lokalizované v plazmatickej membráne, Aus1p a Pdr11p. Ich delécia úplne zastaví príjem sterolov z média1, čoho dôsledkom je letálny fenotyp v prípade, že bunky nie sú schopné syntézy ergosterolu, napríklad v anaerobióze. Expresia sterolových importérov, Aus1p a Pdr11p, je v anaeróbnych podmienkach regulovaná minimálne troma transkripčnými faktormi: Upc2p, Ecm22p a Sut1p1, 2.

Naša práca je zameraná na expresiu génov kódujúcich tieto transportéry a ich transkripčné regulátory v anaeróbnych podmienkach. Zistili sme, že rast v anaeróbnom médiu suplementovanom cholesterolom spôsobuje mnohonásobné zvýšenie expresie AUS1PDR11, v porovnaní s rastom na ergosterole. Zaujímavé je, že suplementácia len 5-percentným ergosterolom v zmesi s cholesterolom znižuje expresiu AUS1 až o 50%. Upc2p a Ecm22p sú vo všeobecnisti považované za aktivátory biosyntetickej dráhy ergosterolu. Avšak naše pozorovania ukazujú, že expresia ECM22 má opačný trend ako UPC2.

Poďakovanie: 

Práca bola realizovaná s finančnou podporou grantov VEGA 2/0185/14 a APVV-0785-11.

Zdroje: 

1 Wilcox LJ, et al. (2002) J Biol Chem 277: 32466-72.
2 Alimardani P, et al. (2004) Biochem J 381: 195-202.
 

Diskusia

Dobry den,

skusali ste aj dlhsiu kultivaciu S.cerevisiae v 5% ergosterole? Pretoze by ma zaujimalo, ci by sa kvasinky po prvotnom "šoku" pri zmene kultivacneho media vedeli adaptovat na nove medium?

Dakujem za odpoved a drzim palce.

Dobrý deň,

dosiaľ sme pri kultivácii na 5% ergosterole merali mieru rastu a expresie len po 6 a 24 hodinách, čím sme sledovali rozdiel medzi exponenciálnou a stacionárnou fázou rastu. Dlhšiu kultiváciu (48 hodín) sme skúšali len s čistým ergosterolom, prípadne cholesterolom, pričom v porovnaní s 24 hodinovou kultiváciou dochádzalo len k minimálnej zmene expresie/rastu. Preočkovanie do nových médii sme neskúšali.

DObry den. Mna by zaujimalo ci ste studovali aj DNA-proteinove interakcie potencialnych transkripcnych faktorov. Je známa nejaká rodina TF, ktorá je zodpovedná za expresiu vami studovanych importerov? dakujem

Dobrý deň, doteraz potvrdené transkripčné faktory Upc2p, Ecm22p a Sut1p patria do rodiny Zn(II)2Cys6 (vyskytuje sa výlučne v hubách a kvasinkách). DNA-proteínové interakcie sme neštudovali.