Ľudský rastový hormón (hGH) je polypeptid pozostávajúci zo 191 aminokyselín, ktorý je syntetizovaný, skladovaný a sekretovaný somatotropnými bunkami adenohypofýzy [1]. V súčasnosti sa používa na liečbu mnohých ochorení. V tejto štúdii bola pre produkciu hGH zvolená kvasinka Pichia pastoris, ktorá je schopná rásť do vysokých optických hustôt [2] a vďaka jej silnému promótoru dokáže produkovať rekombinantné proteíny vo veľkých množstvách. Prvým krokom pri produkcii kmeňa bola integrácia zvoleného génu do hostiteľského organizmu pomocou elektroporácie. Integrácia sa potvrdila PCR reakciou a expresiou v baničkách. Výsledky SDS-PAGE sa overili Dot blot analýzou. Z 50 klonov divého typu P. pastoris až 43 integrantov obsahovalo gén pre hGH. Z nich 2 integranty boli schopné exprimovať hGH v detekovateľnej miere.
Príspevok je výsledkom realizácie projektu: “Príprava biologicky aktívnych látok na báze rekombinantných proteínov (BIOREKPROT, ITMS 26240220048)“ na základe podpory operačného programu Výskum a vývoj financovaného z Európskeho fondu regionálneho rozvoja.
[1] Herman-Bonert, V. S., Melmed, S. (2011). "The pituitary (Third edition)." 83-117.
[2] Cereghino, J. L., Cregg, J. M. (2000) FEMS Microbiol Rev 24, p. 45.
Otazka
Dobry den prajem, velmi zaujimava tema, chcel by som sa opytat, ci planujete Vase vysledky ponuknut komercnej sfere na rutinnu pripravu rastoveho hormonu? Dakujem.
Re: Otazka
Dobry den, tesi ma Vas zaujem. Zatial sme nad komercnou produkciou ani neuvazovali, nakolko protein musime najskor purifikovat do velmi vysokej cistoty, comu sa budeme venovat v blizkej buducnosti.