Charakterizácia kondiciovaného média mezenchýmových kmeňových buniek izolovaných z kostnej drene potkana.

Cieľ: Mezenchýmové kmeňové bunky sú považované za zdroj bioaktívnych látok schopných navodiť prežívanie  a regeneráciu rôznych typov buniek. Cieľom tejto štúdie bolo charakterizovať kondicionované médium mezenchýmových kmeňových buniek  kostnej drene potkana (CM) získaného v rôznych časoch kondicionovania a sledovať jeho vplyv na migračnú odpoveď astrocytov v tzv. scratch modely mechanicky poškodenej primokultúry nervových buniek .

Metódy: Kondicionované médiá boli pripravené  kondicionovaním mezenchýmových kmeňových buniek kostnej drene potkana počas 24 (CM24), 48 (CM48) a 72 hodín (CM72) v médiu bez séra. Hmotnostnou spektrometriou boli analyzované proteomické profily jednotlivých CM a metódou ELISA  boli stanovené koncentrácie štyroch vybraných neurotrofínov (BDNF, NGF, GDNF a VEGF). V in vitro časti experimentu boli použité primárne bunkové kultúry izolované z miechy 4-dňových  potkanov kmeňa Wistar. Kultúry boli na 7.deň mechanicky poškodené poškriabaním a kultivované v kondiciovanom médiu počas 3 dní. Účinok jednotlivých CM  bol hodnotený sledovaním migračnej odpovede astrocytov - meraním šírky lineárnej oblasti bez buniek (vytvorenej po poškriabaní) od jedného okraja k druhému v skupinách ovplyvnených CM oproti kontrole (bez CM).

Výsledky: Proteomickou analýzou bola zistená variabilita v počte a zastúpení identifikovaných špecifických proteínov v závislosti od doby kondiciovania, pričom vyššie zastúpenie proteínov bolo zistené v CM72.  ELISA ukázala  postupné zvyšovanie koncentrácie dvoch sledovaných neurotrofínov (NGF, VEGF) s maximálnou koncentráciou v CM72. V podmienkach in vitro bol pozorovaný rozdielny účinok jednotlivých kondicionovaných médií na migračnú odpoveď astrocytov , pričom tieto účinky boli najvýraznejšie v skupine ovplyvnenej CM72.

Záver: Naše výsledky ukazujú, že predĺžené kondicionovanie vedie k zvýšenému uvoľňovaniu detekovateľných proteínov a k zvyšovaniu koncentrácie niektorých neurotrofínov (NGF, VEGF) v jednotlivých CM. Výsledky pozorovania in vitro časti experimentu naznačujú, že médiá získané po dlhodobom kondicionovaní môžu mať výraznejší účinok na reparačné procesy v kultúrach nervových buniek.