Auricín je angucyklínové antibiotikum produkované polyketid syntázou II typu. Gény kódujúce enzýmy potrebné pre biosyntézu sekundárnych metabolitov sú zväčša usporiadané do klastrov a regulované špecifickými transkripčnými regulátormi CSR (cluster-situated regulators). Gén aur1P kóduje pozitívny regulátor Aur1P, patriaci do rodiny OmpR regulátorov odpovedí. Je exprimovaný z promótora aur1Pp, ktorý je indukovaný v stacionárnej fáze rastu. Negatívny regulátor je kódovaný génom aur1R, divergentne ležiaci ku génu aur1P a patrí do rodiny TetR regulátorov. Naviac je celý klaster regulovaný piatimi génmi patriacimi do rodiny SARP (streptomyces antibiotic regulatory proteins) [1].
Gén aur1O leží vedľa pozitívneho regulátora aur1P, je pravdepodobne kotranskribovaný z aur1Pp promótora a jeho funkcia na základe homologických porovnaní nebola jasná. Preto sme sa rozhodli rozrušiť gén aur1O, čo viedlo k takmer 70% poklesu produkcie antibiotika auricínu bez fenotypickej zmeny kmeňa S. aureofaciens CCM3239. Hmotnostnou spektrometriou sme potvrdili, že rozrušený gén aur1O nemá vplyv na výstavbu antibiotika. Kotranskripcia z promótora aur1Pp naznačuje úlohu Aur1O v regulácii expresie antibiotika spolu s pozitívnym regulátorom Aur1P a preto sme otestovali proteínovú interakciu medzi týmito dvoma regulátormi BACTH systémom a meraním β-galaktozidázovej aktivity sme stanovili silu interakcie. Doposiaľ získané výsledky naznačujú úlohu Aur1O v koaktivácii expresie antibiotika auricínu.
Tento projekt bol podporený Agentúrou pre podporu výskumu a vývoja pod číslom grantu APVV-0203-11.
[1] Kormanec a kol. 2014. Intriguing properties of the angucycline antibiotic auricin and complex regulation of its biosynthesis. Appl Microbiol Biotechnol. 2014, 98(1), p.45-60
otazky
Ahoj Erik, chcem sa opytat ci maju tieto regulatory aur1O a aur1Pp vplyv aj na stabilitu antibiotika ak sa vyskytuju v prostredi. A tiez ci existuju nejake regulatory expresie aj mimo klastrov
Re: otazky
Cau Tomas, regulatory ktore studujeme vplyv na stabilitu antibiotika nemaju, su zodpovedne len za jeho produkciu, teda mnozstva kolko sa toho antibiotika vyprodukuje. Ano, existuju regulatory aj mimo klastrov a mozu byt aj pozitivne aj negativne. V nasom pripade sme doposial identifikovali az 5 dalsich regulatorov patriacich do jednej rodiny a niektore z nich maju vplyv na hladinu produkcie nasho antibiotika.