Štúdium molekúl mikroRNA predstavuje rýchlo sa rozširujúcu oblasť molekulárnej biológie a poznatky o ich regulačnej úlohe sa stávajú jedným zo základných stavebných kameňov nádorovej biológie. Reprezentujú významnú oblasť RNA molekúl, ktorá má nezastupiteľné miesto v regulácii génovej expresie a tým zohrávajú dôležitú úlohu aj v procesoch malígnej transformácie.
Cieľom štúdie bolo pomocou metódy kvantitatívnej RT-PCR analyzovať expresie vybraných mikroRNA (miR- 143, miR-221, miR-21, let-7a, miR-155) u pacientov s kolorektálnym karcinómom a priebežne sledovať zmeny ich expresie pri danom ochorení.
Do tejto štúdie bolo zaradených spolu 65 respondentov vo veku 40 až 85 rokov. Súbor pacientov s diagnostikovaným a histologicky potvrdeným kolorektálnym karcinómom tvorilo 35 jedincov. Celkový počet respondentov v kontrolnej skupine vzoriek tvorilo 30 osôb.
V rámci hľadania vhodnej endogénnej kontroly sme testovali celkovo 55 vzoriek, z toho súbor tvorilo 25 pacientov a 30 kontrolných jedincov. Na základe literatúry sme vybrali troch potenciálnych kandidátov, a to RNU6B, RNU44, RNU48. V našom súbore vzoriek krvi boli všetky tri skúmané referenčné gény vo vzorkách exprimované. Získané dáta uvedených endogénnych kontrol sme vyhodnotili pomocou softvéru GenEx, ktorý pozostáva z algoritmov geNorm a NormFinder. Pre naše merania sme z výsledkov analýz na normalizáciu dát expresie študovaných mikroRNA zvolili ako vhodnú kontrolu referenčný gén RNU48. Pri analýzach sme pozorovali štatisticky významne zvýšenú expresiu sledovaných miRNA v krvi pacientov s CRC pre miR-143 (p < 0,0001), miR-221 (p < 0,0001), miR-21 (p = 0,0195) a let-7a (p = 0,0417) oproti kontrolným jedincom. Na základe získaných výsledkov sme nezistili štatistickú významnosť pre miR-155, hoci jej hladina bola u pacientov s CRC (p = 0,375) mierne znížená. Podľa štatistickej významnosti a z výsledkov ROC analýzy môžeme vysloviť názor, že miR-143 (p < 0,0001), miR-221 (p < 0,0001) a miR-21 (p = 0,0195) môžu slúžiť ako významné potenciálne biomarkery u pacientov s kolorektálnym karcinómom. Zvýšená alebo znížená expresia voľne cirkulujúcich miRNA v periférnej krvi, prípadne v iných telových tekutinách by sa mohla stať základom nových neinvazívnych diagnostických postupov. Predpokladom však musí byť jasná diferenciálna expresia medzi patologickými a kontrolnými vzorkami, ktorá je detegovaná najlepšie v skorých štádiách ochorenia a v diagnosticky relevantných vzorkách (napr. krv, plazma/sérum, moč).
Táto práca bola podporená projektom „Martinské centrum pre biomedicínu (BioMed Martin).“
ITMS kód projektu: 26220220187, ďalej projektom Kompetenčné centrum pre výskum a vývoj v oblasti diagnostiky a terapie onkologických ochorení, ITMS: 26220220153, spolufinancovaných zo zdrojov EÚ a grantom Ministerstvom zdravotníctva SR, číslo: MZ 2012/25-UK-UKMA2.
let-7a
Dobrý deň. Máte veľmi zaujímavý príspevok. Chcela by som sa spýtať, čím si vysvetlujete zvýšené hodnoty let-7a v krvi pacientov a či ste tuto miRNA nemerali aj v tkanive. Ďakujem za odpoved
odpoved
Dobrý deň, ďakujem za otázku. V tkanive sme zatiaľ nemerali, ale plánujeme pokračovať aj na tkanive, resp. parafínových bločkoch a rozšíriť daný súbor. Čo sa týka zvýšenia let-7a v krvi, tam by bolo vhodné, keby sme mali k dispozícii genetický profil pacientov, t.j. k akým mutáciám došlo u pacientov a podobne. Expresia miRNA môže súvisieť aj s mutáciami pri danom karcinóme.