Biologicky aktívne fosfolipidy (BAF®) a od nich odvodené deriváty sa využívajú ako podporná liečba už niekoľko desaťročí v klinickej praxi. Popisovaný je ich pozitívny vplyv v liečbe nádorových ochorení, avšak mechanizmus ich účinku nie je presne známy1. V klinickej praxi sa na liečbu multiformného glioblastómu využíva chemoterapeutická alkylačná látka TMZ2. V našej štúdii sme sledovali prežívanie buniek ľudskej glioblastómovej bunkovej línie T98G pri kultivácii s rôznymi koncentráciami BAF® a temozolomidu (TMZ), ako aj kombináciu ich pôsobenia.
Pomocou cytotoxického metyl-tiazol tetrazoliového (MTT) testu3 sme stanovili prežívanie buniek kultivovaných s neaktívnou (N-BAF®) a aktívnou (A-BAF®) formou BAF® v porovnaní s intaktnou kontrolou (IC). Prežívanie buniek a inhibičné pôsobenie A-BAF® sme potvrdili pomocou histologického (May-Grünwald /Giemsa-Romanowski) a fluorescenčného (DAPI) farbenia.
V druhej časti pokusov sme testovali vplyv TMZ na bunkovú líniu T98G po pôsobení BAF®. Bunky sme predovplyvnili 24 hodín BAF® (0,05%) a následne 48 hodín rôznymi koncentráciami TMZ. Na základe výsledkov MTT testu sme zaznamenali významne znížené prežívanie buniek pri kombinácii pôsobenia A-BAF® a TMZ v porovnaní s IC alebo kombináciou N- BAF® a TMZ.
Výsledky našej štúdie poukazujú na inhibičný efekt pri kultivácii bunkovej línie T98G s A-BAF® po 24 hodinách. Ovplyvnenie glioblastómových buniek in vitro s A-BAF® (0,05%) zvyšuje ich citlivosť oproti TMZ pri najnižšej koncentrácii cytostatika (31,3 µg/ml). Kombinácia A-BAF® (0,05%) a TMZ in vitro je účinnejšia ako podanie samotnej cytostatickej látky. Zmes biologicky aktívnych fosfolipidov A-BAF® má protinádorový účinok a zvyšuje citlivosť glioblastómových buniek na TMZ. Na určenie mechanizmu pôsobenia biologicky aktívnych fosfolipidov je potrebné uskutočniť ďalšie experimenty na molekulovej úrovni.
Práca bola podporená grantom APVV-0224-12, projektom "Centrum excelentnosti pre výskum v personalizovanej terapii (CEVYPET) ", ITMS:26220120053, spolufinancovaným zo zdrojov EÚ a Európskeho fondu regionálneho rozvoja a spoločnosťou Areko spol. s r.o. Praha 4 CZ.
1 Küllenberg D, Taylor LA., Schneider M, Massing U. (2012) Health effects of dietary phospholipids. Lipids Health Dis, 11: 3.
2 Zhang J, Stevens MF, Bradshaw TD. (2012) Temozolomide: mechnisms of action, repair and resistance. Curr. Mol. Pharmacol, 5(1): 102-114.
3 Mosmann T. (1983) Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assay. J Immunol Methods, 65: 55-63.
Otázka
Chcel by som sa spýtať, či máte v pláne testovať kombinovaný účinok BAF a TMZ aj na nenádorovej bunkovej línii? Vopred ďakujem za odpoveď.
Re: Otázka
Dakujem za prispevok do diskusie.
Ano, chceme ziskat vysledky kombinovaneho ucinku BAF a TMZ aj na nenadorovej glialnej bunkovej linii a porovnat ich s vysledkami uvedenymi v prispevku.
Taktiez testujeme ucinky BAF aj na inych nadorovych bunkovych liniach ako je gioblastomova.
Dobry den
Pekna praca, chcela by som sa spytat pri akych dalsich nadorovych i nenadorovych ochoreniach sa vyuziva podporna liecba s BAF. Mohli by ste mi v kratkosti popisat co sa rozumie pod pojmom BAF (ake fosfolipidy). Ako by ste chceli dalej postupovat vo vyskume, aby ste mohli zistit mechanizmus ucinku BAF? Dakujem
Re: Dobry den
Dobry den, dakujem velmi pekne za spatnu vazbu a prispevok do diskusie.
Biologicky aktivne fosfolipidy sa vyuzivaju ako podporna liecba okrem nadorovych ochoreni (na bunkovych liniach bol testovany vplyv napriklad u nadorovych buniek pecene, mocoveho mechura a i.) aj u kardiovaskularnych ochoreni, ochoreni pecene, pri podpore imunologickych funkcii, liecbe zapalovych procesov..
BAF sú prirodne derivaty fosfatidylethanol-aminu, v nasich pokusoch pouzivame zmes fosfolipidov.
Co sa tyka dalsieho postupu, v sucasnosti sa venujeme sledovaniu zmien hladin proteinov apoptotickej drahy.
otázka
Dobrý deň Eva! Veľmi pekná práca! Píšete, že presný mechanizmus účinku BAF, teda fosfolipidov na proces nádorovej inhibície nie je známy. Nie sú známe nejaké iné mechanizmy účinku (okrem mechanizmov inhibície nádorového rastu)? Ďakujem pekne! A držím Vám palce! :)
Re: otázka
Dobry den. Dakujem za spatnu vazbu a prispevok do diskusie.
Fosfolipidy ovplyvnuju bunkove membrany, mozu zvysovat ich permeabilitu, pripadne sposobit ich destrukciu. Perspektiva klinickeho vyuzitia spociva, okrem inhibicie nadoroveho rastu, taktiez v prevencii a inhibicii metastazovania nadorov, ako aj zvysovani imunologickej obrany organizmu.
Re: Re: otázka
aj ja ďakujem za odpoveď :) držím Vám palce!