V posledných rokoch sa upriamuje pozornosť na výskum mezenchymálnych kmeňových buniek a ich využitia v regeneratívnej medicíne. Mezenchymálne kmeňové bunky (MSC) sú charakteristické schopnosťou sebaobnovy, adhézie na podklad, diferenciácie na tri línie buniek - adipocyty, chondrocyty a osteoblasty, a tiež produkcie širokej škály signálnych molekúl ako sú cytokíny, rastové faktory a imunomodulačné molekuly. Dajú sa izolovať zo širokého spektra tkanív, najčastejšie z tukového tkaniva, kostnej drene, pupočníkového tkaniva a najnovšie aj zo zubnej drene. Vďaka týmto vlastnostiam sa MSC ukazujú ako účinný nástroj pri terapii rôznych typov ochorení, čo potvrdzuje aj nárast klinických štúdii za využitia MSC
Naším cieľom bolo zaviesť metodiku izolácie a charakterizácie MSC zo zubnej drene a porovnať génovú expresiu vybraných pluripotetných faktorov medzi MSC pochádzajúcimi zo zubnej drene a MSC pochádzajúcich z iných zdrojov.
MSC so zubnej drene boli izolované vo forme explantátov adherovaných na plastové kultivačné misky. Diferenciačné analýzy a príprava bunkových lyzátov pre analýzu génovej expresie boli uskutočnené v skorých pasážach. Na základe našich výsledkov, MSC izolované zo zubnej drene boli schopné diferencovať v osteogénnu, adipogénnu aj chondrogénnu líniu, pričom schopnosť diferencovať v osteoblasty in vitro si zachovali aj vo vysokých pasážach. Analýza génovej expresie preukázala vyššiu expresiu E-cadherinu, GSC (Goosecoid),
PDX-1/IPF1 a SOX2 v porovnaní s expresiou týchto génov u MSC izolovaných z kostnej drene, tukového tkaniva a tkaniva pupočníka. Na druhej strane ukázala nižšiu expresiu génov Snail, SOX17 a OCT3/4 v rovnakom porovnaní. E-cadherin a transkripčný faktor Snail sú špecifické markery pre epiteliálno-mezenchymálny prechod, GSC zohráva úlohu v rannej embryogenéze hlavy a rebrových oblúkov a SOX2 plní funkciu v neurálnom vývine. Naše výsledky naznačujú, že MSC izolované zo zubnej drene by mohli byť schopné neurálnej diferenciácie či kostnej regenerácie. V budúcnosti by sme sa chceli zamerať na podrobnejšie analýzy, ktoré by tieto výsledky mohli upresniť.
Táto štúdia bola finančne podporená grantovým projektom Ligy proti rakovine
otázky
Dobrý deň Katka! Veľmi pekná práca! :) Chcela by som sa opýtať na počet darcov. Okrem toho, uvádzate, že expresia niektorých génov MSC izolované zo zubnej drene sa líšila od MSC izolovaných z tukového tkaniva, kostnej drene a tkaniva pupočníka. Predpokladám, že jednotlivé vzorky z rôznych tkanív boli získané od rozličných darcov. Môže to ovplyvniť zistené výsledky? Sú známe podobné pozorovania v literatúre? Ďakujem pekne!
Re: otázky
Dobrý deň, ďakujem veľmi pekne. Ano vzorky boli získané od rôznych darcov, v štúdii sme však analyzovali viaceré vzorky zubných drení, tkaniva pupočníka, tukového tkaniva a kostnej drene a výsledky sú hodnoty priemernej expresie v závislosti od zdroja MSC. Týmto sme sa práve chceli vyhnúť fyziologickým rozdielom medzi jednotlivými darcami. Expresiu pluripotetných génov z kostnej drene sme analyzovali aj v inej štúdii (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3771988/ ), kde hodnoty expresie génov boli porovnateľné.