Lymeská borelióza (LB) patrí v dnešnej dobe medzi najrozšírenejšie infekčné ochorenia v Európe a v USA, primárne prenášané kliešťami, prevažne rodu Ixodes. Infekcia sa prejavuje multisystémovým postihnutím organizmu pacienta, s veľkou variabilitou klinických príznakov vzájomne sa prekrývajúcich, preto je právom označovaná za veľkého imitátora viacerých ochorení. Ochorenie vyvoláva spirochéta komplexu Borrelia burgdorferi sensu lato (Bbsl), ktorá má najmä v Európe viacero genotypov rôzneho biologického a geografického pôvodu. Antigénová heterogenita medzi európskymi izolátmi komplikuje možnosť porovnania a štandardizácie laboratórnej diagnostiky LB. Regionálne rozdiely medzi druhmi borélií majú taktiež vplyv na detekciu protilátok v sérach pacientov s LB [1].
Podľa Odborného usmernenia MzSR na diagnostiku a liečbu LB z r. 2009 sa iba pozitívny výsledok v ELISA (enzymová imunoadsorbentová analýza) testoch v prípade nepriekaznej klinickej symptomatógie má upresniť imunoblotovým testom.
Cieľom nášho príspevku je poukázať na časté falošne pozitívne/negatívne výsledky, ktoré sa vzhľadom na vyššie uvedené usmernenie vyskytli pri vyšetrení vzoriek ELISA. Na detekciu protilátok proti Bbsl boli použité dva sérologické testy: ELISA s prítomnosťou špecifického proteínu VlsE a Western blot (WB) taktiež s VlsE. Oba testy boli zakúpené z firmy EUROIMMUN (Nemecko).
LB sa vyskytovala vo väčšej miere u žien 60% ako u mužov 40%. Najpostihnutejšiou vekovou kategóriou bola 56 – 65 rokov. Testovaním pomocou ELISA testu sme pozorovali veľké množstvo falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov testov pre protilátky triedy IgM aj IgG. V prípade detekcie protilátok triedy IgM bolo až 54,97% falošne negatívnych výsledkov a falošne pozorovaných výsledkov bolo pozorovaných 29,27%. Falošných výsledkov testov bolo až 49,53% z celkového počtu vyšetrení. Falošných výsledkov v detekcii protilátok triedy IgG pomocou ELISA testu bolo pozorovaných 43,10%. Falošne negatívnych výsledkov bolo pozorovaných viac 56,81% ako falošne pozitívnych výsledkov 14,15%. Ak je test falošne negatívny, potom vyšetrovaný subjekt, ktorý by mal podstúpiť terapiu, je ďalej ohrozovaný rôznou manifestáciou ochorenia a postúpením do ďalších štádií LB. Ak je test falošne pozitívny, potom vyšetrovaný subjekt, ktorý je v skutočnosti zdravý, podstúpi zbytočnú terapiu antibiotikami (doxycyklín, amoxicilín), ktorá zaťažuje organizmus.
Významná nezhoda ELISA testov v porovnaní s referenčným WB IgG testom, s významnou prevahou falošne negatívnych výsledkov predstavuje v prípade ochorenia LB ten horší scenár. Ak je skoré štádium LB neliečené, choroba môže postúpiť do neskorších štádií, zasiahnuť viac tkanív a orgánov a spôsobiť vážne poruchy ich funkcie. Súčasne sa zvyšujú priame aj nepriame náklady na zdravotnú starostlivosť.
Štúdia je súčasťou predkladaného projektu VEGA 1/0231/16.
[1] Stanek, Gerold, et al. Lyme borreliosis. The Lancet 2012, 379.9814: 461-473.
otázka
Dobrý den,
chcel by som sa opytat, preco je podla Vas podla MZ SR uprednostnovana ELISA pre WB? Je cenovo vyhodnejsia? Dostupnejsia? Dakujem
Re: otázka
Dobrý deň,
ELISA test je finančne, ale aj časovo výhodnejší (my sme používali automatickú premývačku).
otázka
Dobrý deň, rada by som sa opýtala, či ste dané výsledky dosiahli pri použití plne automatickej premývačky, alebo s použitím ručnej premývačky? ja používam ručnú premývačku a mám podobný...� problém s negatívne pozitívnymi výsledkami. Ďakujem a pekný deň.
Re: otázka
Dobrý deň,
áno používali sme automatické premývanie vzoriek pomocou prístroja MRW AM60, Multi-Reagent Washer (DYNEX Technologies,Inc., USA ). Pekný deň
Re: Re: otázka
Ďakujem:)
Aplikačný výstup
Dobrý deň Karolína, svojou otázkou chcem nadviazať na prvého diskutujúceho - sú dôvody len finančné a časové, ktoré bránia zavedeniu paralelnej diagnostiky oboma testami? Neviem, kde všade sa na Slovensku robí diagnostika, či je to nejak centralizované, alebo nie...čisto teoreticky, sú klinické laboratóriá štandardne vybavené tak, aby mohli oba testy vykonať? S ohľadom na možné vyššie finančné výdavky v súvislosti s dodatočným riešením "uniknutých" prípadov by sa to možno aj finančne vyplatilo (aj s prihliadnutím na mzdy za prácu navyše a ďalšie nepriame náklady). Ale to by bolo treba spraviť dôkladnú farmakoekonomickú analýzu a tu je možno problém, pretože (laicky sa domnievam), mnohé prípady ďalších poškodení môžu byť nerozpoznané z hľadiska vyvolávajúcej príčiny (napríklad reumatické ochorenia) a pacienti sú liečení bez toho, že by boli evidovaní ako "obete" boreliózy a tým zahrnutí do štatistík a výpočtov finančných nákladov. Domnievate sa, že takýto problém môže vzniknúť? Nakoľko sa dá spätne vypátrať, že ide pravdepodobne o následky boreliózy? Ďakujem. iwa
príspevok
Dobrý deň,
rada by som objasnila dôležitosť tejto práce z pohľadu zdravotníckej starostlivosti. Laboratórna diagnostika Lymeskej boreliózy je celosvetový problém a nie je doteraz štandardizovaná. Vo veci uprednostňovania ELISA testov pred westernblotom je na Slovensku podstatná finančná stránka, ale aj skutočnosť, ako sa na preplatenie týchto analýz pozerá zdravotná poisťovňa... Pre zdravotníctvo vypracovala bodovací systém, podľa ktorého sa zdravotnícky úkon boduje a podľa toho ho poisťovňa preplatí, ale aj nemusí... Doteraz nebola na Slovensku robená podobná štatistická analýza významu duálneho vyšetrovania biologického materiálu s podozrením na Lymeskú boreliózu. Vďaka tejto analýze sa potvrdilo vysoké percento nezrovnalostí v laboratórnom vyšetrovaní takýchto vzoriek na Slovensku. Čo v praktickom význame znamená, že stanovisko praktického ošetrujúceho lekára, ktorý dostane výsledok vyšetrenia ako "negatívny" bude také, že pacienta nebude liečiť. Podľa pokynov MzSR sa však len vzorka pozitívna v ELISA teste má vyšetriť aj westernblotom (postupujú podľa stanoviska odborných skupín v zahraničí). To znamená, že takto sa nevyšetrí viac ako 56% podozrivých vzoriek! Čo má samozrejme dopad na zdravie pacienta (často končí na vozíku, príp. na psychiatrii), ako aj na ďalšie významné faktory.
Otazka
Dobry den,
budete nejakym sposobom tlacit na kompetentnych aby sa veci okolo diagnostiky zmenili? Su na to nejake paky?
Dakujem, s pozdravom, P. Farkas
Re: Otazka
Dobrý deň,
ďakujeme za Váš záujem. Samozrejme, snažíme sa na tento problém dlhodobo upozorňovať. Preto sme s touto analýzou vôbec začali, aby sme mali aj relevantné dôkazy. Tejto problematike sa venujeme už roky, riešili sme aj projekt MzSR a podali sme aj ďalší návrh na projekt s obdobným názvom, ako je tento príspevok. Záleží nám na tom, aby sa táto problematika riešila aj cez semináre pre medikov, budúcich všeobecných lekárov. Pekný deň.