Pre eukaryotické organizmy, ktoré získavajú energiu (ATP) vo forme oxidatívnej fosforylácie je esenciálne si stabilne udržiavať mitochondriálnu DNA. Na tomto procese sa podieľajú viaceré proteíny, ako reparačné , replikačné , zbaľovacie a podobne. Zostáva však ešte veľa nejasností, ktoré sa týkajú mechanizmov kontrolujúcich stabilitu mitochondriálneho genómu a jeho segregácie pri delení eukaryotickej bunky. Jednou z takýchto nezodpovedaných otázok zostáva molekulárny mechanizmus vzniku cytoplazmatických petite mutantov. Etídium bromid ako mutagénna a potenciálne karcinogénna látka je často využívaná v laboratóriach aj na vizualizáciu DNA alebo ako špecifický mutagén na tvorbu petite mutantov. Po pôsobení etídium bromidu na kultúru kvasiniek vznikne 100% respiračne deficitných buniek s fragmentovanou mitochondriálnou DNA, čo je pre väčšinu eukaryotických buniek letálne. Kyselina nalidixová, ako inhibítor DNA topoizomeráz, pri spolupôsobení s etídium bromidom znižuje percento respiračne deficitných buniek v niektorých prípadoch až na 0%. Keďže problematika fragmentácie mitochondriálnej DNA poskytuje stále veľa nezodpovedaných otázok, naším cieľom bude identifikovať proteín zahrnutý v mechanizme mutagenézy mtDNA, čo prinesie lepšie objasnenie regulácie stability mitochondriálnej DNA a môže predstavovať potenciálny nástroj pri liečbe mnohých ochorení súvisiacich s destabilitou a poškodením mitochondriálnej DNA.
otazky
Zaujimalo by ma vo vasej praci niekolko veci:
1) aky je samotny vplyv kys.nalidixovej na mitochondrialne funkcie, resp morfologiu, viabilitu a pod.
2) je mozne navodit petite mutanty pomocou EtBr aj u inych eukaryotickych buniek nez S.cerevisiae?
3) v metodike Q-PCR ste ziskali dva peaky, comu prisluchaju?
Dakujem za odpovede a drzim palce.
Re: otázky
Systém zobrazil moje odpovede ako že ich písal guest, ale písala som ich ja :) Takže neváhajte kontaktovať mňa :)
otazka
Dobry den. Mna by zaujimalo ci EtBr nema vplyv zaroven aj na jadorve geny, ci to vlastne neovplyvni dalsie studia mitochondrialnych mutantov, ak by boli variabilne kvoli mutaciam v jadrovych genoch. dakujem
Re: otazka
Dobry den. EtBr je interkalačné činidlo, má vplyv na topologiu DNA, či aj na zmenu expresie jadrových génov Vám neviem povedať. Presný mechanizmus EtBr mutagenézy je neznámy.