Naša štúdia bola zameraná na vplyv chronického ochorenia diabetes mellitus typu 1 na vlastnosti Na,K-ATPázy v mozgovej kôre potkanov oboch pohlaví. Na,K-ATPáza má kľúčovú úlohu v udržiavaní homeostázy Na+ a K+ iónov v intracelulárnom priestore a predstavuje jeden z dôležitých komponentov hematoencefalickej bariéry. Diabetes sme vyvolali u 8-týždňových potkanov jednorazovým intraperitoneálnym podaním streptozotocínu v dávke 65 mg.kg -1. Po dobe 16 týždňov trvania diabetu došlo k zvýšeniu hladiny glukózy v krvi o 120 % u samcov a o 203 % u samíc. Pri aktivácii Na,K–ATPázy z mozgovej kôry substrátom ATP in vitro v rozmedzí 0,16 - 8 mmol·l-1 ATP sme pozorovali stabilitu enzýmovej aktivity v reakcii na chronické pôsobenie diabetu u oboch pohlaví potkanov. Avšak, pri sledovaní vlastností enzýmu z hľadiska pohlavnej diferenciácie sme zistili významné zvýšenie aktivity Na,K-ATPázy v celom koncentračnom rozsahu energetického substrátu ATP u samíc bez ohľadu na ich fyziologický stav v porovnaní so samcami. Podobný trend nastal aj pri aktivácii enzýmu s narastajúcimi koncentráciami kofaktora Na+. Pri oboch typoch aktivácie sme pozorovali výrazne vyššiu hodnotu Vmax u samíc v porovnaní so samcami u kontrolných ako aj u diabetických potkanov. Naše výsledky poukazujú na zvýšený počet aktívnych molekúl Na,K-ATPázy v tkanive mozgovej kôry u samíc potkanov nezávisle na ich fyziologickom stave v porovnaní s príslušnými samcami.
Štúdia bola podporená Slovenskou Grantovou agentúrou VEGA : 2/0141/13.
Kvantitatívne vlastnosti
Dobrý deň, poster ma zaujal, chcem sa spýtať niekoľko otázok, nie je mi jasné ako ste merali kvantitatívne vlastnosti? A ďalej v závere píšete, že: "Naše výsledky poukazujú na stabilitu kvantitatívnych vlastnosti." A hneď v druhej vete: "Zistili sme zvýšený počet aktívnych molekúl Na,K-ATPázy." Celkom nerozumiem, zdá sa mi, že tie vety si odporujú? Čo reprezentuje pojem stabilita kvantitatívnych vlastnosti? Tiež sa chcem spýtať akou metódou ste stanovovali množstvo proteínov? Vopred ďakujem za odpovede.
Re: Kvantitatívne vlastnosti
Ahoj Marcelka :)
Dakujem za otazku a ospravdlnujem sa za oneskorenu odpoved.
Obsah vyizolovanych bielkovin sme stanovili metodou podla Lowryho, s pouzitim BSA - albumine bovine serum 1mg/ml ako standardy, princip spociva v tvorbe farebneho komplexu medi v dosledku pritomnosti peptidickej vazby a redukcii kyseliny fosfomolybdenano-fosfowolframovej v pritomnosti aromatickych amonikyselin, vznikaju modre komplexy, dobr meratelne pri vlnovej dlzke 500-800nm...
Na porovnanie kvantitativnych zmien molekuly Na, K-ATPazy sme v nasej praci z kinetickych merani vyhodnitili parameter Vmax, Vmax-hodnota nam odrzkadluje mnozstvo aktivnych molekul enzymu, jej zvysena hodnota poukazuje na zvysene mnozstvo aktivnych molekul enzymu. Pripustam, ze mate pravdu, ze stabilita a zvysene mnozstvo su dve protichodne tvrdenia, pravdepodobne doslo k chybnej formulacii nasich vysledkov.
Kazdopadne zaver z nasej prace je taky, ze 16 tyzdnovy diabetes sam o sebe nema vplyv na tento enzym (=stabilita), ale zaznamenali sme pohlavne rozdiely a to v podobe zvysenej hodnoty Vmax u samic (kontrolnych aj diabetickych) v porovnani s prislusnymi skupinami samcov(= zvysenie poctu aktivnych molekul).