Úvod: Aktivácia mastocytov prostredníctvom ich membránových receptorov vedie ku amplifikácii zápalového procesu, zvýšenej produkcii hlienu a bronchokonstrikcii v dýchacích cestách. Zo širokého spektra receptorov na membráne žírnych buniek, sa naša pozornosť upriamuje na receptory horkej chuti (TAS2R), primárne prítomné na chuťových pohárikoch jazyka. Ich úloha na mastocytoch nie je preštudovaná. Cieľom tejto štúdie je sledovať vplyv agonistu TAS2R amarogentínu na aktiváciu mastocytov. Amarogentín je zlúčenina obsiahnutá v koreni horca žltého (Gentiana lutea L.) s preukázanou horkou chuťou.
Metodika: In silico: Schopnosť amarogentínu interagovať s jednotlivými podtypmi TAS2R bola vyhodnotená na základe databázy BitterX. Imunocytochémia: Prítomnosť TAS2R a FcεRI (receptor pre IgE) na mastocytoch bola preukázaná imunologickou analýzou za využitia špecifickej interakcie medzi sledovanými proteínmi a primárnymi a sekundárnymi protilátkami. In vitro: Kolorimetrická analýza aktivita β-hexozaminidázy bola použitá na sledovanie vyplavovania histamínu indukovaného IgE. β-hexozaminidáza je proteolytický enzým, ktorý sa z granúl mastocytov uvoľňuje spolu s histamínom. Vplyv TAS2R na sekréciu histamínu sme sledovali za použitia 7 koncentrácii amarogentínu. In vitro: Fluorescenčné meranie intracelulárnej hladiny Ca2+ sa realizovalo pomocou Fura2 AM. Zmena Ca2+ signalizácie po ovplyvnení TAS2R bola vyvolaná aplikáciou amarogentínu (100 µM).Uvoľnenie Ca2+ z vnútrobunkových zdrojov bolo indukované pridaním tapsigargínu a Ca2+signalizácia bola ukončená pridaním EGTA.
Výsledky: In silico analýza ukázala, že amarogentín môže aktivovať 13 podtypov TAS2R, s najvyššou pravdepodobnosťou podtyp TASR14, ktorého prítomnosť na membráne mastocytov sme dokázali imunocytochemickou analýzou. Meranie aktivity β-hexozaminidázy ukázalo inhibičný účinok amarogentínu na degranuláciu mastocytov. Amarogentín čiastočne redukoval nárast hladiny intracelulárneho Ca2+ vyvolaný tapsigargínom.
Záver: Na základe našich výsledkov môžeme konštatovať, že amarogentín, agonista TAS2R, má vplyv na cytoplazmatické hladiny Ca2+a uvoľňovanie histamínu. Predpokladáme, že nadobudnuté výsledky výrazne prispejú ku objasnenie jeho a zapojenia do regulácie funkcie mastocytov a tiež patofyziológie ochorení, v ktorých mastocyty hrajú kľúčovú úlohu.
Táto práca vznikla za podpory Slovenskej agentúry pre výskum a vývoj [Grant APVV-19-0033], Ministerstva školstva, vedy, výskumu a športu SR [[Grant VEGA 1/0314/21, VEGA 1/0253/19] a Univerzity Komenského v Bratislave Grant [UK/188/2023].
Dobrý deň, prosím Vás, in
Dobrý deň, prosím Vás, in silico metodiky sú pomerne novým druhom experimentálneho prístupu, mohli by ste popísať jednotlivé kroky: ako a kde sa dá získať špecifický vzor molekuly (SMILES) a ako potom prebieha dátová analýza. Nakoľko je nápomocný software a nakoľko sa vyžaduje skúsenosť, intuícia a erudícia vedca v celom tomto procese. Vopred Vám ďakujem za Vaše vyjadrenia, ZB
Dobrý deň,
Dobrý deň,
v prvom rade ďakujem za otázku. Vzorec molekuly vo forme SMILES môžete najčastejšie nájsť v databáze PubChem, kde stačí do vyhľadávača zadať názov študovanej molekuly. Ak látka, ktorú skúmate nemá klasifikované označenie, alebo jej SMILES nie je k dispozícii na PubCheme, je možné ho vygenerovať pomocou programov ChemSketch alebo ChemAxon. Avšak s prácou s uvedenými programami nemám skúsenosti. Práca so softwérom BitterX je pomerne jednoduchá, proces získavania výsledkov je publikovaný v Zborníku prác Ústavu farmakológie JLF UK (Nove_trendy_vo_farmakoterapii_XIII.pdf (uniba.sk) s názvom " In silico analýza využitia obsahových látok z koreňa horca na ovplyvnenie symptómov alergickej astmy". V tomto príspevku nájdete metodický postup získavania dát z BitterX. Ešte raz ďakujem za zapojenie do diskusie. JM
Ďakujem veľmi pekne za
Ďakujem veľmi pekne za precíznu odpoveď. Všetko dobré do Vašej ďalšej práce Vám želá ZB.
Prajeme pekný deň, Vážený pán
Prajeme pekný deň, Vážený pán Mažerik, dovoľte mi v mene celého organizačného tímu Preveda pogratulovať Vám k skvelému úspechu.
V aktuálnom ročníku konferencie sme vašu štúdiu vybrali medzi ocenené práce.
Prajeme Vám a celému autorskému kolektívu veľa úspechov v napredovaní vášho výskumu. Držíme Vám palce a veríme, že sa s nami vy, prípadne vaši kolegovia podelíte so skvelými výsledkami aj v ďalších ročníkoch Interaktívnej Konferencie Mladých Vedcov.
Ešte raz gratulujeme! V priebehu najbližších týždňov Vám zašleme výhru v podobe malého darčeka. Tím OZ Preveda!
Kliknutím na odkaz si môžete stiahnuť diplom.