Probiotiká ukryté v mikročasticiach

Probiotiká ukryté v mikročasticiach

Celkové hodnotenie

Vedecká práca
92%
Prevedenie (dizajn)
93%
Diskusná interakcia
84%
PoužívateľVedecká prácaDizajnDiskusná interakcia
RNDr. Erika Kellerová PhD.100%100%100%
Ing. Peter Keša100%100%-
Mgr. Mária Suváková100%100%100%
Katarína Kudláčová100%100%100%
RNDr. Jana Štofilová PhD.100%100%60%
PharmDr. Štefan Husár PhD.40%60%20%
RNDr. Veronika Benetinová PhD.100%100%100%
RNDr. Jana Janočková PhD.100%100%100%
Mgr. Eva Kicková100%100%100%
Ing. Lukáš Kolarič-100%-
Ing. Zuzana Brnoliaková PhD.80%60%80%
ISBN: 978-80-972360-4-5

Probiotiká ukryté v mikročasticiach

Monika Kvaková1 ,
1 Ústav Experimentálnej Medicíny, Lekárska fakutla, Univerzita Pavla Jozefa Šafárika, Košice, Slovenská republika
kvakova.m@gmail.com

V poslednej dobe je značný záujem o štúdium probiotík a ich účinku ako jednej z možných alternatív antibiotickej liečby. Už teraz sú probiotiká využívané ako podporná liečba pri viacerých črevných ochoreniach a pri liečbe antibiotikami s cieľom urýchliť obnovu prirodzenej črevnej mikrobioty. Typickými zástupcami probiotických mikroorganizmov sú baktérie reprezentované rodmi Lactobacillus a Bifidobacterium. Podľa svetovej zdravotníckej organizácie (WHO) sú probiotiká definované ako živé mikroorganizmy, ktoré prospešne vplývajú na zdravie hostiteľa, ak sa užívajú v primeranom množstve. Avšak veľmi dôležité je zabezpečiť, aby probiotické mikroorganizmy po perorálnom podaní prežili transport cez kyslé prostredie žalúdka a boli tak schopné kolonizovať črevo a zahájiť proliferáciu [1]. Jedným z najznámejších spôsobov ako ochrániť probiotické mikroorganizmy pred drsnými a stále sa meniacimi podmienkami gastrointestinálneho traktu (GIT) je proces mikroenkapsulácie, pri ktorom dochádza k uzatvoreniu probiotík do polymérových mikrokapsúl (MCs). MCs dokážu transportovať „žijúci náklad“ na miesto určenia bez toho aby stratil svoju funkčnosť [2,3].

Mikroenkapsulácia je vo všeobecnosti proces, pri ktorom sú nie len probiotiká, ale aj enzýmy, prírodné bioaktívne látky, plyny, atď. zabudované do matrice alebo membrány nosiča [4,5]. MCs dokážu ochrániť náklad od degradačných vplyvov počas prechodu GIT, ale aj počas procesu stabilizácie (napr. lyofilizácie) a skladovania pri izbovej teplote. MCs dokážu taktiež zabezpečiť uvoľnenie nákladu za priaznivých podmienok v kontrolovateľných dávkach. Polymér, ktorý sa používa pri mikroenkapsulácii nesmie byť cytotoxický, antimikrobiálneho charakteru, ale musí byť priepustný pre živiny a metabolity, aby nedošlo k usmrteniu buniek, ktoré sú zabudované v MCs [6,7]. Medzi množstvom polymérov, ktoré sú vo všeobecnosti označené ako bezpečné materiály (napr. alginát, chitozán, xantánová guma, škrob, pektín, kazeín, atď.), práve alginát je najčastie využívaný ako nosič pre probiotiká. Je to hlavne vďaka jeho nízkej cene, biokompatibilite, jednoduchej výrobe kapsúl a ľahko modifikovateľnému povrchu. [1]

Synergický efekt probiotík a prebiotík na zloženie ľudskej črevnej mikrobioty je nepopierateľný. V mnohých štúdiách inkorporovali do MCs probiotiká spolu s prebiotikami, a tak zvýšili ich stabilitu a antibakteriálne vlastnosti [8,9]. Atia et al. (2018) študovali ako alginátové MCs, ku ktorým pridávali inulín v rôznej koncentrácii, dokážu ochrániť nasledovné probiotické kmene: Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivariusPediocucus acidilactici. Zistili, že vďaka prídavku inulínu, antimikrobiálne a probiotické vlastnosti bakteriálnych kmeňov neboli ovplyvnené procesom mikroenkapsulácie, a zároveň sa zvyšovala účinnosť ochrany voči kyslému prostrediu GIT [10]. O výrobu produktov obsahujúcich omega-3 mastné kyseliny a probiotické kmene je taktiež veľký záujem, pretože bolo dokázané že funkčné produkty obsahujúce spomínané bioaktívne zložky poskytujú zdravotné benefity konzumentovi [11]. Štúdie kombinujúce obe zložky ukazujú, že mastné kyseliny zvyšujú účinnosť probiotických mikroorganizmov a naopak probiotiká dokážu modulovať metabolizmus tukov. Bolo dokázané, že poly-nenasýtené mastné kyseliny ovplyvňujú adhéziu laktobacilov na konkrétnych miestach v čreve, pravdepodobne zmenou zloženia membránových mastných kyselín v  epitelových bunkách čreva [12-14]. V súčasnosti sa využívajú mastné kyseliny a probiotíká ako doplnková terapia najmä pri ochoreniach ako je IBD, alergia a reumatoidná artritída so sľubnými výsledkami. Probiotiká aj mastné kyseliny hrajú dôležitú úlohu v imunitnom systéme a majú súvis s lokálnymi a systémovými zápalovými mechanizmami. Eratte a kol. (2015) uviedli, že koacerváty tvorené z komplexu srvátkového proteínového izolátu a arabskej gumy dokážu úspešne enkapsulovať tuniakový olej a Lactobacillus casei a tak synergicky zvýšiť oxidačnú stabilitu omega-3 mastných kyselín tuniakového oleja. Taktiež bola potvrdená viabilita a vitalita L. casei počas doby uskladnenia a zároveň hydrofóbnosť povrchu buniek a schopnosť L. casei priľnúť na črevnú stenu bola významne zvýšená spolu-uzatvorením  („co-microencapsulation“) s omega-3 mastnými kyselinami do MCs [15-17].

V súčasnosti je záujem o priemyselnú výrobu MCs, v ktorých je mikroenkapsulovaných viacero bioaktívnych zložiek, a to hlavne vďaka technológii zabezpečujúcej stabilitu, účinnosť, znížené náklady na výrobu konečného produktu a možnosť aplikácie vo funkčných potravinách. Napriek spomínaným mimoriadnym vlastnostiam MCs, sú nevyhnutné ďalšie in-vivo a klinické štúdie zaoberajúce sa potenciálnou toxicitou týchto komplexných systémov. Zároveň aj štúdie ohľadne cielenej aplikácie jednotlivých kmeňov probiotických mikroorganizmov pri konkrétnych ochoreniach.

Poďakovanie: 

Táto práca vznikla za podpory grantov: APVV 16–0176 a VVGS 2018-890.

Zdroje: 

[1] B. A. Shori (2017) HAYATI J Biosci. 24, 1. 2017
[2] L. H. Cui, C. G. Yan, H. S. Li, W. S. Kim, et al. (2018) Microbiol Biotechnol. 28, 510
[3] M. G. Díaz, D. Birch, F. Wan, H. M. Nielsen (2018) Adv Drug Deliv Rev. 124, 107.
[4] K. G. H. Desai, H. J. Park (2005) Drying Technol. 23, 1361
[5] F. Zhu (2017) Food Chem. 229, 542.
[6] T. Huq, C. Fraschini, A. Khan, et al. (2017) Carbohydr Polymer. 168, 61.
[7] M. T. Sánchez, M. A. Ruiz, A. (2017) Lasserrot, M. Hormigo, M. E. Morales, Food Hydrocolloids. 69, 67.
[8] H. A. Albadran, A. Chatzifragkou, V. V. Khutoryanskiy, et al. (2015) Food Research International. 74, 208.
[9] D. Y. Ying, L. Sanguansri, R. Weerakkody, et al. (2016) J Funct Foods. 25, 447.
[10] A. Atia, A. Gomaa, B. Fernandez, et al. (2018) Probiotics Antimicrob Proteins. 10, 157.
[11] D. Eratte, K. Dowling, C. J. Barrow, et al. (2018) Trends Food Sci. Technol., 71, 121.
[12] P. E. Kankaanpaa, S. J. Salminen, E. Isolauri, et al. (2001) FEMS Microbiol Lett. 194, 149.
[13] A. Bomba, R. Nemcová, S. Gancarčíková, et al. (2003) Berl. Munch. Tierärztl. Wochenschr. 116, 312.
[14] R. Nemcová, R. Borovská, J. Koščová, et al. (2012) Res Vet Sci, 93, 39.
[15] D. Eratte, S. McKnight,  T. R. Gengenbach, et al. (2015) J Funct Foods. 19, Part B, 882.
[16] D. Eratte, B. Wang, K. Dowling, et al. (2016) J Funct Foods. 23, 485.
[17] D. Eratte, K. Dowling, C. J. Barrow, et al. (2017) Food Chem. 227, 129.

Diskusia

Dobrý deň,
Aký je Váš príspevok k tejto téme?

Dobrý deň, ďakujem za otázku. Môj príspevok je všeobecnejšie zameraný, aby čitatelia boli oboznámení o dôležitosti probiotík a prebiotík resp. omega-3 v každodennom živote a možnosti zachovania ich funkčnosti. Náš ústav sa sústredí na izoláciu nových ľudských probiotických kmeňov a na štúdium úlohy črevnej mikrobioty v patogenéze chronických chorôb človeka a možnosti ich prevencie a terapie s využitím cielenej modulácie črevnej mikrobioty. Taktiež študujeme interkciu jednotlivých probiotických kmeňov s prebiotikami a omega-3,preto vyzdvihujem možnosť ich kombinácie do jednej mikročastice, ktorá by ochránila dané bioaktívne látky pri prechode GIT človeka. My sa momentálne samotnou mikroenkapsuláciou nezaoberáme, ale spolupracujeme s Tekmar s.r.o,ktorí vyrábajú funkčné potraviny, preto verím, že je to jedna z aktuálnych tém hodná rozbehnutia projektu.

Dobry den, chapem snahu o max. efektivitu procesu mikroenkapsulacie a "kokteilu" v nom, ale neobavate sa vzajomnych interakcii bioaktivnych molekul? To je dalsi balik technologickych problemov, ktory vstupuje do celeho procesu pri praktickej aplikacii, ci? Su uz nejake namerane data aj ohladom tejto skutocnosti? ZB

Dobrý deň, ďakujem za otázku. Na našom ústave študujeme (in vitro) interakciu probiotických kmeňov zatiaľ konkrétne L.plantarum a L.reuteri s komerčne dostupnými prebiotikami Orafti Synergy 1 re...sp. Orafti P95 a čistým inulínom. Doposiaľ sme zistili, že prebiotické substráty zvyšujú schopnosť L.plantarum adherovať na črevný epitel (diferencované Caco-2), a zároveň táto kombinácia dokáže inhibovať adherenciu patogénnej E.coli. Preto áno, ako ste správne poznamenala je treba riešiť či konkrétne bioaktívne látky spolu interagujú alebo nie predtým ako ich uzavrieme do mikročastíc. Preto vzájomné interakcie prob+preb na ústave študujeme. Ako som spomínala u niektorých druhov probiotík dochádza k zlepšeniu ich vlastností, ale naopak u niektorých k ich potlačeniu, preto je potrebné nájsť vhodné kombinácie bioaktívnych látok.

Ďakujem pekne za uvedenie do problematiky enkapsulácie a jeho moderné praktické využitie v medicíne zameranej na zdravú stravu a životný štýl.

Mikroenkapsulácia sa ako technika používa už takmer 100-ročie (prvé pokusy 30´roky). Od vtedy prešla mikroenkapsulácia mnohými odvetviami. Vy sa zaoberáte enkapsuláciou mikroorganizmov, predovšetkým probiotík.

Vieme, že enkapsulované bunky práve v mikročasticiach sú chránené pred imunitným systémom a súčasne produkujú rozličné rastové faktory. Moja otázka smeruje k tomu, že do akej miery sú práve probiotika obsiahnuté v mikroenkapsulach odolné voči imunitnému systému „hostiteľa“.

V dnešnej dobe sa farmakologický priemysel zameriava na časovo-závislý spôsob dávkovania liečiva. Je možné mikroenkapsulaciou dosiahnuť podobný efekt, alebo je enkapsulácia čisto ochranný mechanizmus kým je liečivo (aj probiotika/prebiotika) cielene transportované.

A ešte taku maličkú otázočku. Je možná enkapsulácia mikroenkapsulácie, tz. dvojitá enkapsulacia/poprípade mikroenkapsulácia?

ďakujem za venovanie času mojim otázkam

Ďakujem veľmi pekne za trefné otázky.
1. Ako probiotiká sa používajú kmene, ktoré su GRAS (Generally Recognized as Safe), čiže imunitný systém proti nim nebojuje, ale je stimulovaný probiotikami, a tak je stále pripravený na boj proti patogénom. Ak teda som správne pochopila otázku, tak áno mikrokapsule zabezpečujú ochranu voči imunitnému systému, ale hlavnou úlohou mikrokapsúl je zabezpečiť ochranu pri prechode jednotlivými časťami gastrointestinálneho traktu, ktorý ma v rôznych častiach rôzne pH a enzýmy (schopné usmrtiť probiotické mikroorganizmy).

2.V prvom rade sa jedná o ochranný mechanizmus, kým sa probiotikum nedostane na požadované miesto určenia. Avšak môžu sa využiť rôzne materiály s rôznymi vlastnosťami, a tak bude probiotikum „vypustené“ v rôznych častiach GIT. Musia byť splnené podmienky ako vyššie pH, prípadne prítomná aktivita niektorého z enzýmov GIT, dokonca existujú mikrokapsule senzitívne na enzýmy produkované mikroorganizmami, špecificky sa vyskytujúcimi v odlišných častiach hrubého čreva.

3.Áno je možná dvojitá enkapsulácia, keď sú napr. ako vrstvy použité odlišné materiály a môže to byť taktiež využité napr. pri enkapsulácii rôznych kmeňov resp. iných bioaktívnych látok (potencujúcich účinok probiotík), ktoré sú primárne uzavreté v jednom materiáli a následne dokopy v druhom materiáli.